答：

1、 限制性酶切后電泳質粒消失，沒有條帶，或者電泳條帶出現嚴重的拖尾現象?？赡苁沁x用了野生型的或者是end A+的宿主菌所致，并且未用Buffer W1洗滌純化柱。請確保用Buffer W1洗滌純化柱，或者按附錄中的方法對質粒DNA作進一步的純化。

2、 酶切不能完全切開。本試劑盒純化得到的質粒DNA不存在酶切抑制物，可直接用于酶切（比如20 μl酶切體系中，除去2 μl 10×酶切緩沖液和1 μl限制性內切酶的體積后，可直接加入17 μl洗脫的質粒DNA用于酶切）。如果酶切不能完全切開，應嘗試減少質粒DNA的用量，或者增加限制性內切酶的用量，并適當延長酶切時間。